Koronavírus syndrómu akútnej hnačky ošípaných (SADS-CoV) je novoobjavený enterický patogénny koronavírus ošípaných, ktorý môže spôsobiť vodnatú hnačku u novonarodených prasiatok a spôsobiť významné ekonomické straty priemyslu ošípaných.V súčasnosti neexistuje žiadna vhodná sérologická metóda na vyhodnotenie účinnosti SADS-CoV infekcie a vakcíny, preto je naliehavo potrebné použiť účinný enzýmový imunosorbentný test (ELISA) na kompenzáciu tohto nedostatku.Tu bol skonštruovaný rekombinantný plazmid exprimujúci SADS-CoV spike (S) proteín fúzovaný s ľudskou IgG Fc doménou, aby produkoval rekombinantný bakulovírus a exprimovaný v HEK 293F bunkách.Proteín S-Fc je purifikovaný živicou s proteínom G a zachováva si reaktivitu s protilátkami proti ľudskému Fc a SADS-CoV.Potom sa S-Fc proteín použil na vývoj nepriamej ELISA (S-iELISA) a optimalizáciu reakčných podmienok S-iELISA.Výsledkom bolo, že analýzou hodnoty OD450nm 40 SADS-CoV negatívnych sér potvrdených imunofluorescenčným testom (IFA) a Western blottingom bola stanovená medzná hodnota 0,3711.Koeficient variácie (CV) 6 SADS-CoV pozitívnych sér v rámci a medzi cyklami S-iELISA bol nižší ako 10 %.Test skríženej reaktivity ukázal, že S-iELISA nemá žiadnu skríženú reaktivitu s inými vírusovými sérami ošípaných.Okrem toho na základe detekcie 111 vzoriek klinického séra bola celková miera zhody IFA a S-iELISA 97,3 %.Vírusový neutralizačný test so 7 rôznymi hodnotami OD450nm séra ukázal, že hodnota OD450nm zistená pomocou S-iELISA pozitívne korelovala s vírusovým neutralizačným testom.Nakoniec sa S-iELISA uskutočnila na 300 vzorkách séra z prasacej farmy.Komerčné súpravy iných prasacích enterovírusov ukázali, že miera IgG pozitívnych SADS-CoV, TGEV, PDCoV a PEDV bola 81,7 %, 54 % a 65,3 %.6 %, resp.Výsledky ukazujú, že S-iELISA je špecifická, citlivá a reprodukovateľná a môže sa použiť na detekciu infekcie SADS-CoV v priemysle ošípaných.Tento článok je chránený autorským právom.všetky práva vyhradené.
Čas odoslania: 22. júna 2021